生物熒光分析濾光片

在熒光光譜中，來(lái)自寬帶光源或激光的光入射到樣品上，然后樣品可能會(huì)發(fā)出微弱的熒光信號(hào)。熒光濾光片組通常由激發(fā)濾光片、二向色鏡（二向分光鏡）和發(fā)射濾光片組成，它們組合在一個(gè)濾光片立方體中。激發(fā)濾光片用于確保只有所需波長(zhǎng)入射到樣品上，而發(fā)射濾光片用于傳遞熒光信號(hào)并拒絕激發(fā)光和任何不需要的光。二向色鏡通常以 45° 的入射角使用，以將激發(fā)光反射到樣品并將發(fā)射信號(hào)傳輸?shù)綑z測(cè)器。激發(fā)、發(fā)射和二向色濾光片通常成組使用，以最大化所需信號(hào)并最小化任何不需要的信號(hào)。

（熒光顯微鏡原理）

生物熒光分析常用的就是熒光光譜法分析，常用于共聚焦光路和流式細(xì)胞術(shù)中。

（共聚光路）

流式細(xì)胞分析的光學(xué)系統(tǒng)

光學(xué)系統(tǒng)由激光器和若干組透鏡、濾光片及小孔組成，它們分別將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)送入到不同的電子探測(cè)器。其主要光學(xué)元件是分色反射鏡(DL)和濾光片(filter)。分色反射鏡(488DL、550DL、600DL、640DL)用于選擇被測(cè)熒光波長(zhǎng)，只允許大于特定波長(zhǎng)的光通過(guò)，而將小于特定波長(zhǎng)的光反射到光電檢測(cè)器（長(zhǎng)波通特性）。濾光片一般分為三類：長(zhǎng)通濾片(long pass filter，LP)、短通濾片(short pass filter，SP)和帶通濾片(band pass filter，BP)。

例如，F(xiàn)ITC染料發(fā)射出525?nm的綠色熒光，PE染料發(fā)射出575?nm的橙色熒光，分別選擇550DL和525BP組成的濾片組和600DL和575BP濾片組，即可達(dá)到特異地接收FITC和PE熒光信號(hào)的目的。光電倍增管和硅光電二極管，可分別將側(cè)向散射光和前向散射光以及525～675等不同的熒光信號(hào)收集檢測(cè)。

（流式細(xì)胞儀原理圖）

原理描述：?jiǎn)渭?xì)胞液流經(jīng)過(guò)細(xì)胞室，激光照射細(xì)胞(或微粒)，細(xì)胞或微粒上承載的熒光抗體被激發(fā)后發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光，并分別通過(guò)不同濾光片，檢測(cè)器收集不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，經(jīng)計(jì)算機(jī)分析處理，將各通道的數(shù)字轉(zhuǎn)換為圖形顯示出來(lái)。

熒光濾光片參考